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石蠟冰凍切片免疫組化/石蠟冰凍切片免疫熒光

免疫組化

       應用免疫學基本原理,通過標記的特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分別進行組織和細胞原位檢測,從而進 行定位、定性及相對定量的研究。 

實驗意義 

1.免疫組織化學可應用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。 

2.可與組織化學染色方法的形態學診斷相結合,提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準確率,并為腫瘤進行進一步的病理分型。 

3.指導和提供臨床治療方案的選擇。 

實驗步驟 

1.石蠟切片免疫組化: 

①67℃烘箱烘片2小時,常規脫蠟至水,用pH 7.4的PBS沖洗三次,每次3 min; ②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min,蒸餾水沖洗三次,PBS沖洗三次,每次3 min; 

③3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性,PBS沖洗三次,每次3 min; 

④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10 min,吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗,37℃孵育1-2 h或者 4℃孵育過夜; 

⑤PBS沖洗三次,每次3 min;⑤滴加稀釋至適當比例的帶標記二抗,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min; 

⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min; 

⑦顯色劑顯色,自來水充分沖洗,復染細胞核,酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。 

2.冰凍切片免疫組化: 

①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 μm; 

②載玻片可不打底,裱片后立刻用電吹風吹干; 

③染色前需用冷丙.酮4℃固定10~20 min; 

④PBS洗2次,每次5 min; 

⑤3%H2O2滅活內源性過氧化物酶20 min,需避光處理; 

⑥后續血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似,最后脫水透明封片進行觀察。

結果展示:

石蠟切片免疫組化


冰凍切片免疫組化



實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期:1-2周 

2.交付標準:蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等) 

需確認的信息 

1.是做石蠟切片還是冰凍切片(推薦做石蠟切片) 

2.樣本的種屬和類型,是組織還是細胞? 

3.樣本的數量 

4.是否提供一抗,我方可代購 

5.半定量分析要求 

6.拍照要求


收費標準/服務周期/提供結果: 

歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

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【平臺項目開展范圍】慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動 物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI、核 心期刊等服務。 

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