一、皮下植瘤模型 

       裸鼠腫瘤模型是比較常見(jiàn)和常用的一種腫瘤動(dòng)物模型，它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作 用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細(xì)胞接種和瘤塊接種兩種方式，接種取材有手術(shù)活檢標(biāo)本、癌性胸腹水標(biāo) 本和體外培養(yǎng)的細(xì)胞系三種。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優(yōu)點(diǎn)。 

常見(jiàn)模型 

腫瘤類型 

細(xì)胞系 

肺癌 A549,NCH-H358,NCH-H460,NCH-H526, NCH-H1299,NCH-H1650,NCHH1688,NCH-H1975,95-D,PC-10,Calu-3

乳腺癌 MDA-MB-231, MDA-MB-468, MDA-MB-453, HCC70, HCC1954, MDA-MB-361, MCF-7, BT474, BT549, SK-BR-3 

胃癌 MKN-28, MKN-45, BGC-823, HGC-27, MKN-28, SCH, SGC-7901, SNU-5, SNU16, MGC-803, AGS 肝癌 Hep-3B, Huh-7, PLC/PRF/5, QGY-7703, SK-HEP-1, SMMC-7721, HepG-2, BEL7402, BEL-7404, MHCC97H, LM3 

胰腺癌 AsPC-1, BxPC-3, Capan-1, Capan-2, CFPAC-1, MIAPaCa-2, PANC-1 

腎癌 ACHN, A498, 786-O, OS-RC-2 

結(jié)直腸癌 COLO 201, COLO 205, DLD-1, HCT-116, HT-29, LoVo, LS1034, LS174T, Caco2, RKO , SW480, SW620, SW1116, SW948 

膠質(zhì)細(xì)胞瘤 A172, U87-MG, U251, U343MG, U373, SW1783

常見(jiàn)案例 

裸鼠皮下成瘤模型（CDX模型） 

模型描述： 

常見(jiàn)問(wèn)題 

1.接種量 要查文獻(xiàn)來(lái)確定接種量，在找不到任何相關(guān)資料的情況下，就用到1*107/0.2ml/site,再高也沒(méi)有意義 了。如果你的細(xì)胞很小，1*107/0.1ml也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是1*107/0.1ml/site。查文獻(xiàn) 看他們的構(gòu)建條件是什么樣的，比如培養(yǎng)條件，接種量，接種位置什么的，是不是一定要用雌性鼠等等。 

2.接種部位 腋窩中部外側(cè)皮下為好。皮下腫瘤模型中，想要成瘤率高就接種在腋下。接種時(shí)由裸鼠體側(cè)腰部稍靠 上的部位進(jìn)針，要保證與接種點(diǎn)的距離小于針頭的長(zhǎng)度，向頭部方穿行，絕對(duì)不能刺破皮膚或者刺破肌肉 層，當(dāng)針頭到達(dá)接種位點(diǎn)時(shí)注射，退出針頭。 

3.是否用手術(shù)標(biāo)本荷瘤 如果是藥效試驗(yàn)，不建議用手術(shù)標(biāo)本，因?yàn)镾FDA的臨床前研究指導(dǎo)原則上明確指出要用建株的腫瘤 株進(jìn)行試驗(yàn)，因?yàn)橛檬中g(shù)標(biāo)本的試驗(yàn)可重復(fù)性差。取材的部位：腫瘤生長(zhǎng)活躍，狀態(tài)良好，結(jié)締組織比較 少的地方。運(yùn)送途徑：無(wú)菌、冰浴保溫，無(wú)菌培養(yǎng)液浸泡，時(shí)間不能超過(guò)1個(gè)小時(shí)。最好一個(gè)小時(shí)內(nèi)就能 夠接種到動(dòng)物體內(nèi)。接種部位：腋下。另外，手術(shù)標(biāo)本還有一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)：你不能保證取得的標(biāo)本一定能夠順 利地成瘤并且用于試驗(yàn)。 

4.接種時(shí)間 最好在1小時(shí)之內(nèi)完成。但在我實(shí)際操作過(guò)程中，裸鼠的數(shù)量又多，1小時(shí)之內(nèi)根本做不完的，所以你 可以預(yù)先將細(xì)胞放在冰盒里暫為保存。 

5.腫瘤倍增時(shí)間 腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ湍[瘤的倍增時(shí)間（doubling time），應(yīng)該是在瘤體積100－800之間計(jì)算。

 二、原位瘤模型 

原位移植腫瘤模型的制作 

1.腫瘤的來(lái)源：人的胸腹水，手術(shù)切除的腫瘤，小鼠自發(fā)或誘發(fā)的腫瘤，或者已經(jīng)建系的腫瘤細(xì)胞株。 2.移植瘤的建立一般是選擇自發(fā)瘤或誘發(fā)瘤組織塊，或人的原代腫瘤細(xì)胞為佳。 已建立的腫瘤細(xì)胞株經(jīng)過(guò)多次傳代后，其生物學(xué)特性已發(fā)生一定程度的改變，如形態(tài)學(xué)上的改變、惡 性程度以及轉(zhuǎn)移特性的變化等 

3.移植瘤的接種方法 

1）腹水瘤移植接種法 

2）實(shí)體瘤移植接種法 

（1）小塊接種法 

（2）腫瘤組織漿接種法： 

（3）培養(yǎng)細(xì)胞接種法 

4.腹水型腫瘤模型的制作 

常規(guī)復(fù)蘇腫瘤細(xì)胞并培養(yǎng)，取指數(shù)生長(zhǎng)期腫瘤細(xì)胞，離心收集，顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×107／ml，取健康小鼠，無(wú)菌條件下每只小鼠腹腔接種細(xì)胞懸液 0.2-0.5 ml，約 8-10 d 成腹水瘤。 

5.皮下腫瘤模型的制作 

1）.細(xì)胞接種法：取腹腔接種腫瘤細(xì)胞 7-l0d 、腹水生長(zhǎng)良好的小鼠脫頸處死，無(wú)菌抽取腹水以生理鹽 水稀釋調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×107／ml（一般以生理鹽水 l:2-l:3 倍稀釋），每只 0.2 ml 接種到小鼠腋窩皮下， 建立小鼠皮下移植瘤模型。抽出的腹水應(yīng)為白色之濃稠液體為佳。.直接將體外培養(yǎng)的指數(shù)生長(zhǎng)期腫瘤細(xì) 胞，離心收集，顯微鏡下常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為 1×107／ml，取健康小鼠，無(wú)菌條件下每只小鼠 皮下接種細(xì)胞懸液 0.2 ml。 

2）.組織塊接種法：先用細(xì)胞接種法建立皮下腫瘤模型。 選擇接種后 7-l0d，腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無(wú)潰破的 動(dòng)物，脫頸處死后消毒操作部位皮膚然后切開(kāi)，選擇生長(zhǎng)良好的瘤組織置于無(wú)菌平皿內(nèi)(平皿內(nèi)放置少許生 理鹽水或細(xì)胞培養(yǎng)液)。將腫瘤組織剪成 2-3mm 的小塊，向無(wú)菌套管內(nèi)塞人一小塊，接種于健康動(dòng)物前腋 窩皮下，整個(gè)接種時(shí)間應(yīng)盡早可能短，一般不應(yīng)超過(guò) 30min。如接種動(dòng)物數(shù)較多，可制成細(xì)胞懸液進(jìn)行接 種，以上法切取生長(zhǎng)良好的癌組織，剪成小塊，用無(wú)菌玻璃研磨，磨勻后裝人無(wú)菌容器內(nèi)，加生理鹽水稀 釋 l:3-l:4 的瘤細(xì)胞，每個(gè)動(dòng)物接種 0.2ml。 

6.移植性腫瘤模型的優(yōu)點(diǎn): 

1).可以使一群動(dòng)物同時(shí)帶有相同的腫瘤。 

2).腫瘤生長(zhǎng)速率比較一致，個(gè)體差異較小。 

3）.接種的成活率高，接近 100％ ，對(duì)宿主的影響也類似，易于客觀的判斷療效。 

4）. 腫瘤形態(tài)、生長(zhǎng)率、對(duì)藥物的敏感性、動(dòng)物的死亡時(shí)間等非常相近。、 

7.皮下移植性腫瘤的缺點(diǎn):
1).皮下移植腫瘤生長(zhǎng)速度快，增殖比率高，體積倍增時(shí)間短，是與人體腫瘤的顯著不同。
2).生物學(xué)行為往往僅有腫瘤的局限性生長(zhǎng)和浸潤(rùn)，難以觀察到重要的淋巴和血道轉(zhuǎn)移行為，與自然狀態(tài)腫痛相關(guān)性不高，不能很好地模擬腫痛在人體內(nèi)的自然生長(zhǎng)過(guò)程，對(duì)干研究具病理生理過(guò)程存在較大的局限性，僅適合用作評(píng)價(jià)藥物療效的初步篩選模型。

8.原位移植腫瘤模型： 指將腫瘤細(xì)胞或腫瘤組織塊原位移植到免疫缺陷動(dòng)物的組織器官內(nèi)，使之產(chǎn)生腫瘤并形成自發(fā)性轉(zhuǎn)移 灶。此種模型是目前較為理想的動(dòng)物模型，為腫瘤的生長(zhǎng)提供了最適宜的環(huán)境，能較好的模擬人體內(nèi)腫瘤 的發(fā)生、 發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移的全過(guò)程。 

9.原位移植腫瘤模型的制作： 

1）.腫瘤的來(lái)源：人的胸腹水，手術(shù)切除的腫瘤，小鼠自發(fā)或誘發(fā)的腫瘤，或者已經(jīng)建系的腫瘤細(xì)胞 株。2）.方法：將稀釋好的腫瘤細(xì)胞 50-100ul 約 2×108/ml 直接接種到器官的漿膜下。或者先將腫瘤細(xì)胞 皮下接種，達(dá) 1 cm左右，瘤組織取出切成 1-3mm 的小塊。將準(zhǔn)備好的癌組織塊植入器官的漿膜下，縫合 漿膜。

10.同位移植瘤動(dòng)物模型的優(yōu)點(diǎn)： 可以模擬出同原發(fā)腫瘤發(fā)病部位相似的腫瘤微環(huán)境，同時(shí)也能夠在相應(yīng)的部位形成轉(zhuǎn)移灶，可以避免 由于移植位點(diǎn)特異性所引起的假陽(yáng)性結(jié)果．并且可以對(duì)臨床上的一些情況進(jìn)行模擬，如應(yīng)用在轉(zhuǎn)移癌的研 究來(lái)模擬那些臨床上已經(jīng)切除了原發(fā)腫瘤而又發(fā)生了轉(zhuǎn)移的患者。同位裸鼠移植瘤動(dòng)物模型成為我們研究 治療方案，闡明與浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和腫瘤治療相關(guān)的分子生物學(xué)機(jī)制提供了重要而有效的手段。 

11.原位移植瘤模型的應(yīng)用： 

1）為彌補(bǔ)異位移植方法的不足，避免假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生。對(duì)于所有實(shí)驗(yàn)性治療方法來(lái)講，最終都要應(yīng) 用原位移植瘤動(dòng)物模型來(lái)更深一步研究其抗腫瘤譜及其分子生物學(xué)機(jī)制。 

2）對(duì)于細(xì)胞毒類藥物，那些對(duì)腫瘤微環(huán)境起調(diào)控作用的抗腫瘤藥物只可以在原位移植瘤動(dòng)物模型上進(jìn) 行研究。如可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)物的化療藥物和可以調(diào)控機(jī)體局部組織反應(yīng)的藥物。 

3）如果想觀察藥物對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤的作用，最好應(yīng)用原位裸鼠移植瘤動(dòng)物模型進(jìn)行研究。