TUNEL凋亡顯色法 

       TUNEL（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling）法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發生凋亡時，DNA內切酶被激活，核小 體間的基因組DNA被切斷，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）加 上帶有生物素（Biotin）標記的dUTP即Biotin-dUTP,隨后于辣根過氧化物酶（HRP）標記的streptavidin結合，在HRP的催化 下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞，從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到細胞凋亡。

實驗意義 

1.TUNEL法是一種分子生物學與形態學相結合的研究方法，可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色，可以準 確反映細胞凋亡最典型的生物化學和形態特征。 

2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養的細胞等進行細胞凋亡檢測，靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。 

3.操作簡便快捷，在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。 

實驗步驟 

1.石蠟切片TUNEL顯色法：

①石蠟切片常規脫蠟至水，脫蠟劑二甲苯，至水劑乙醇； 

②PBS漂洗3×5 min；

③加入蛋白酶K工作液37℃反應15-30 min, PBS漂洗3×5 min

④4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定15-30 min，PBS漂洗3×5 min；

⑤浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min；

⑥加入適量TdT酶反應液，暗濕盒中37℃反應1 h，用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3×5 min；

⑦浸入0.3% H2O2封閉內源性過氧化物酶活性，室溫孵育3-5 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑧滴加Streptavidin-HRP工作液，37℃反應30-60 min，PBS漂洗3×5 min； 

⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數次； 

⑩選擇是否用DAPI復染細胞核； ?脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。

2.冰凍切片TUNEL顯色法： 

①新鮮組織經處理后，立即在恒冷冰凍切片機內切片，厚度為5~6 μm；

②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12 h； 

③4%多.聚.甲.醛（pH7.4的PBS）室溫固定10 min，PBS漂洗3×5 min；

④浸入封閉液（3%H2O2）室溫封閉10 min，PBS漂洗3×5 min；

⑤浸入通透液（0.1%Triton X-100溶于PBS中），室溫通透30 S-2 min； ⑥加入適量TdT酶反應液，暗濕盒中37℃反應1 h，用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3×5 min；⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數次； ⑩選擇是否用DAPI復染細胞核； ?脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。 

結果展示

實驗完成周期及交付標準 

1.實驗周期：1-2周 

2.交付標準：蠟塊、切片、染色圖片、實驗報告（實驗步驟、試劑、耗材等） 

需確認的信息 

1.樣本的種屬 

2.樣本的類型（固定的組織or蠟塊or切片） 

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求 參考文獻

收費標準/服務周期/提供結果： 

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