平行反應監(jiān)測技術(shù)（PRM）： 

       PRM是一種基于高分辨、高精度質(zhì)譜的離子監(jiān)視技術(shù)，能夠?qū)δ繕说鞍踪|(zhì)、目標肽段（如發(fā)生翻譯后修飾的肽段）進行選 擇性檢測，從而實現(xiàn)對目標蛋白質(zhì)/肽段進行絕對定量。PRM技術(shù)基于Q-Orbitrap為代表的高分辨、高精度質(zhì)譜平臺，首先 利用四級桿質(zhì)量分析器的選擇能力，用Q1選擇目標肽段的母離子，隨后在collision cell 中對母離子進行碎裂，最后利用 Orbitrap分析器在二級質(zhì)譜中檢測所選擇的母離子窗口內(nèi)的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質(zhì)/肽段進行準 確地特異性分析。 

實驗意義：

       PRM技術(shù)是針對無抗體蛋白的驗證新技術(shù)，用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相對定量蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)的驗證，或?qū)碗s 樣本中的目標蛋白質(zhì)進行靶向定量分析。 

實驗步驟： 

用PRM進行蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)驗證的一般步驟為：

用PRM對特定蛋白質(zhì)進行相對/絕對定量的一般步驟為：

結(jié)果展示：

實驗完成周期及交付標準： 

1.實驗周期：一般PRM時間為：5-10天 

2.交付標準： 

組學驗證： 

①主要儀器、試劑和實驗方法。

②PRM目標離子信息：肽段序列和定量子離子。 

③方法學重復性評價：三次技術(shù)重復的色譜峰面積相對標準偏差（RSD）（預實驗結(jié)果）。 

④實驗結(jié)果：二級圖譜，XIC圖譜，原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，t test p值。 

相對/絕對定量： 

①主要儀器、試劑和實驗方法。 

②PRM目標離子信息：肽段序列和定量子離子。 

③方法學評價：相對定量的重復性評價—測試樣本的三次技術(shù)重復的色譜峰面積相對標準偏差（RSD）（預實驗結(jié)果）； 

絕對定量的方法學評價—標準品XIC圖譜，LOD，LOQ，線性 范圍，6個稀釋梯度得到的標準曲線及線性公式（每個稀 釋度有3次技術(shù)重復）。 

④實驗結(jié)果： 

相對定量：二級圖譜，XIC圖譜，原始峰面積強度值，矯正后的相對表達量，兩組樣本間的相對比值，t test p值。

絕對定量：二級圖譜，XIC圖譜，原始峰面積強度值，根據(jù)標準曲線計算得到的蛋白質(zhì)濃度值，兩組樣本間的相對比值，t test p值。 

需確認的信息： 

1.樣品：

① 如果樣品為蛋白質(zhì)溶液，蛋白質(zhì)總量≥300mg; 

② 如果是組織樣品，樣品總量≥0.1g； 如果是細胞樣品，細胞數(shù)量≥107個；

③ 如果是體液樣品，血清≥200ml，腦脊液≥200ml，尿液≥1ml，淚液≥1ml。

2.樣品采集過程中使用到塑料制品時，盡量使用無色進口產(chǎn)品，以減少塑料制品中雜質(zhì)對質(zhì)譜檢測的影響。