實(shí)驗(yàn)操作流程：

（培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為例） 

1、新生兒臍帶：在無菌條件下，于健康產(chǎn)婦分娩后立即取新生胎兒臍帶。長(zhǎng)度>20 cm，兩端扎緊投入到 4℃臍帶保存液中，1h內(nèi)送細(xì)胞培養(yǎng)室。 

2、剪去臍帶兩端和臍帶上有夾痕及血腫部分，盡量擠干凈臍帶內(nèi)血液。 

3、用生理鹽水沖洗臍帶表面至無血色。 

4、用輸血器內(nèi)接有穿刺器的軟管，找到臍靜脈，將軟管針頭一端插入臍靜脈，用止水夾固定，另一端接 20 m1注射器，吸取PBS反復(fù)沖洗臍靜脈直至無血色液體流出為止；將臍帶另一端用止血鉗夾閉，向臍靜脈中灌入0．1％ I型膠原酶溶液，使之充盈，夾閉軟管。

5、37℃水浴中孵育20 min，其間輕輕擠壓并旋轉(zhuǎn)臍帶，以使酶溶液充分接觸血管內(nèi)壁。 

6、將細(xì)胞一酶溶液收集于預(yù)先裝有溫培養(yǎng)液小三角瓶中。用2倍于消化液的溫PBS沖洗臍靜脈，一并收集于小三角瓶中，將細(xì)胞懸液裝入10 ml離心管，1000 r／min離心10 min，棄上清，吹打懸浮，再次離心10 min，重懸細(xì)胞并接種于鋪有明膠的25 cm2培養(yǎng)瓶中，置于37℃ 5％ C02飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后更換培養(yǎng)液，以后每隔2d換液1次。 

7、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)：當(dāng)原代細(xì)胞融合80％以上后，加入 0．05％ 胰蛋白酶一0．02％EDTA 溶液消化，倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞皺縮變圓、彼此分離時(shí)棄消化液，加入細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化，收集細(xì)胞懸液。1 000 r／min離心10 min，棄上清，制成單細(xì)胞懸液。此時(shí)可用0．5％臺(tái)盼藍(lán)染色，計(jì)算活細(xì)胞百分率，并以血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度為1×10 個(gè)／ml，接種于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)。待細(xì)胞長(zhǎng)滿，彼此融合成片時(shí)依上述方法繼續(xù)傳代培養(yǎng)。

客戶提供： 

細(xì)胞建模的藥品或試劑，細(xì)胞（可由星森林代購）

交付標(biāo)準(zhǔn)： 

1、細(xì)胞 

2、完整項(xiàng)目報(bào)告（材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果） 

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果： 

歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。 

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