實驗技術簡介： 

體外神經細胞的培養已成為神經生物學研究中十分有用的技術手段。 

神經細胞培養的主要優點:

(1)分散培養的神經細胞在體外生長成熟后,能保持結構和功能上的某些特點, 而且長期培養能形成髓鞘和建立突觸聯系,這就提供了體內生長過程在體外重現的機會。 

(2)能在較長時間內直接觀察活細胞的生長、分化、形態和功能變化,便于使用各種不同的技術方法如相差顯微鏡、熒光顯 微鏡、電子顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、同位素標記、原位雜交、免疫組化和電生理等手段進行研究。 

(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化學和生物因子（如 神經營養因子）等實驗條件, 觀察條件變更對神經細胞的直接或間接作用。 

(4)便于從細胞和分子水平探討某些神經疾病的發病機制，藥物或各種因素對胚胎或新生動物神經細胞在生長、發育和分化等各方面的影響。 

一、液體配制：

硼酸硼砂緩沖液：0.05M四硼化鈉45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

胰酶－EDTA消化液： 胰酶－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡鹽液定容至100ml。

所用的培養板、培養瓶或玻片預先經 100μg/L多聚賴氨酸硼酸鹽緩沖液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干備用。 

二、操作步驟如下： 

1、出生2 d SD大鼠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預冷的D-Hanks平衡鹽液中。 

2、在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱內消化20min，中間搖晃一次。 

3、隨后用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的培養液（DMEM＋10％FBS）的離心管內終止消化液作用 5min。 

4、用滴管吸出組織轉移到裝有預冷的DMEM＋10％FBS的離心管內，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數次，靜置后取上清吸到另一支離心管內。重復上述步驟2～3次。 

5、將所收集的上清經200目篩網過濾。 

6、過濾后的細胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內加入新鮮培養液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細胞懸液。 

7、細胞計數，調整細胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內，放入CO2孵箱中培養。培養48h后換液并加入 Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。 

三、無菌操作的注意事項：

細胞原代培養一定要保持工作區的無菌清潔，先用紫外燈殺菌1h，操作前用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上口罩和帽子，操作時不能大聲說話，雙手戴上一次性橡膠手套，整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。 

四、服務流程： 

1、 討論分析實驗方案 

2、 確定服務內容 

3、 簽訂服務合同 

4、 進行實驗，定期向客戶反饋 

5、 整理實驗報告 

6、 完成合同內容 

7、 后續實驗服務，進一步合作

五、細胞服務項目： 

收費標準/服務周期/提供結果： 

歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

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