線粒體組學(xué)原理 

       線粒體組學(xué)是指圍繞線粒體質(zhì)量控制為核心的分子生物學(xué)研究，主要聚焦于線粒體結(jié)構(gòu)和功能的變化。其中，線粒體功能主要包括：線粒體膜電位、線粒體鈣滲漏、線粒體ROS生成、線粒體抗氧化能力、線粒體有氧呼吸、線粒體轉(zhuǎn)運(yùn)、線粒體遺傳、線粒體凋亡信號(hào)；線粒體結(jié)構(gòu)包括：線粒體DNA穩(wěn)態(tài)、線粒體有絲分裂、線粒體自噬、和線粒體異源性（同源性）融合。 

線粒體組學(xué)的優(yōu)勢(shì)和必要性 

線粒體既是能量代謝中心、也是信號(hào)傳遞中心、更是細(xì)胞命運(yùn)（凋亡或存活）的決定者，因此線粒體對(duì)于維持細(xì)胞、組織、 器官的結(jié)構(gòu)和功能具有重要作用。 

線粒體組學(xué)的應(yīng)用范圍 

1. 代謝、腫瘤等疾病發(fā)病和進(jìn)展的機(jī)制研究

2. 線粒體（母系）遺傳疾病的分子診斷和基因篩查

3. 動(dòng)植物代謝適應(yīng)和代謝轉(zhuǎn)變研究

4. 細(xì)胞死亡和細(xì)胞存活的雙軌研究途徑

5. 線粒體特異性藥物的毒理學(xué)和藥理學(xué)研究

線粒體組學(xué)研究思路

1. 確立線粒體組學(xué)是否改變（功能還是結(jié)構(gòu)，選擇一種指標(biāo)觀察）

2. 聚焦線粒體組學(xué)改變的分子過(guò)程（氧化、能量、凋亡、鈣信號(hào)等）

3. 選用線粒體組學(xué)常用的激活和挽救試劑藥物，進(jìn)行線粒體組學(xué)的正反實(shí)驗(yàn)?zāi)M驗(yàn)證將線粒體組學(xué)的改變上升到疾病的發(fā)病或是進(jìn)展的背景中

樣本獲取（組織、細(xì)胞或純化線粒體）——線粒體結(jié)構(gòu)或功能檢測(cè)——線粒體結(jié)構(gòu)或功能檢測(cè)的亞分子生物過(guò)程——線粒體組學(xué)正反實(shí)驗(yàn)?zāi)M——線粒體組學(xué)在疾病中的確認(rèn) 

線粒體組學(xué)的研究方法 

1. 結(jié)構(gòu)研究

a) 線粒體形態(tài)學(xué)觀察

i. 免疫熒光技術(shù)

ii. 電鏡（包括普通電鏡和免疫電鏡）

b) 線粒體DNA基因組穩(wěn)態(tài)篩查 

i. 線粒體DNA的復(fù)制和拷貝數(shù)變化，qPCR法

ii. 線粒體DNA的突變檢測(cè)（點(diǎn)突變、框移突變等）

iii. 線粒體SNP突變位點(diǎn)篩查 iv. 線粒體RNA（包括tRNA）功能和含量鑒定，qPCR和WB法

c) 線粒體特異性蛋白轉(zhuǎn)位、修飾

i. 線粒體凋亡蛋白（細(xì)胞色素c釋放）轉(zhuǎn)位檢測(cè)，WB和免疫熒光法

ii. 線粒體內(nèi)外膜蛋白.磷酸化、泛素化、乙酰化、寡聚化檢測(cè)，WB或免疫熒光法

2. 功能研究

a) 線粒體呼吸功能 

i. 線粒體氧化磷酸化分析，線粒體呼吸測(cè)定儀檢測(cè)

ii. 線粒體有氧呼吸蛋白變化，WB或ELISA法

iii. 線粒體代謝底物和代謝生成物檢測(cè)，ELISA法

b) 線粒體ROS（氧化應(yīng)激和抗氧化能力）

i. 線粒體ROS生物含量檢測(cè)，流式或免疫熒光法

ii. 線粒體ROS介導(dǎo)的磷脂或蛋白氧化：液相質(zhì)譜儀或WB法

iii. 線粒體ROS類型檢測(cè)：熒光探針、ELISA法

iv. 線粒體抗氧化蛋白含量變化：WB、ELISA c) 線粒體鈣穩(wěn)態(tài)

i. 線粒體鈣瞬時(shí)變化檢測(cè)：鈣火花（鈣波）檢測(cè)

ii. 線粒體基線鈣變化檢測(cè)：流式或免疫熒光

iii. 線粒體鈣峰值分析：3D鈣火花測(cè)定

d) 線粒體凋亡檢測(cè)

i. 線粒體凋亡信號(hào)啟動(dòng)檢測(cè)：ELISA法或免疫熒光

ii. 線粒體凋亡特異性過(guò)程檢測(cè)：cyt-c滲漏免疫熒光和WB法

iii. 線粒體凋亡蛋白譜變化：WB或qPCR法

e) 線粒體膜電位檢測(cè) 

i. 線粒體膜電位單熒光檢測(cè)（功能線粒體標(biāo)記檢測(cè)）：流式或免疫熒光 

ii. 線粒體膜電位雙熒光檢測(cè)（功能和損傷線粒體雙標(biāo)記檢測(cè)）：流式或免疫熒光

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