實驗操作流程： 

成骨誘導培養液配備與誘導操作： 

1、準備含10%FBS的α-MEM培養液； 

2、在備好的α-MEM培養液中添加50μM 抗壞血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松； 

3、準備6孔培養板，將P4細胞按照5×103個/平方厘米的規格接種于原始α-MEM培養液中； 

4、待細胞長至基本融合后，更換上述制備完成的成骨誘導培養液； 

5、每三天換液一次，細胞長至7天時進行堿性磷酸酶染色； 

6、二十八天后再進行礦化結節的茜素紅染色。 

素紅染色方法介紹： 

1、去除細胞當前使用培養液，使用PBS清洗兩次； 

2、使用10%甲醛室溫固定15分鐘，完成后使用重蒸餾水沖洗兩次； 

3、按照1ml/孔加入40mM的茜素紅染色液，室溫孵育20min并輕微振蕩； 

4、清除掉沒有完全結合的染料，用重蒸餾水漂洗并振蕩5min重復4次； 

5、傾斜放置2min,吸取多余的重蒸餾水；倒置顯微鏡觀察拍照記錄。 

成脂誘導培養液配備與誘導操作： 

1、配置FBS10%含量的HG-DMEM培養液； 

2、在配制完成的HG-DMEM培養液中加入1μM地塞米松,10μg/ml胰島素，200μM吲哚美辛和0.5mM IBMX； 

3、準備6孔培養板，將P4細胞按照2×104個/平方厘米的規格接種于原始HG-DMEM培養液中； 

4、待細胞長至基本融合后，更換上述制備完成的成脂誘導培養液培養2天，在用只含有10μg/ml胰島素的成脂維持培養液培養1天，如此交替循環培養至14天，使用紅油O染色。

紅油O染色方法介紹： 

1、去除細胞使用的當前培養液，使用PBS清洗兩次； 

2、27.5%甲醛室溫固定20分鐘； 

3、重蒸餾水清洗3此，空氣中干燥； 

4、加入0.5%的紅油室溫孵育一小時； 

5、配制70%乙醇溶液清洗3次； 

6、倒置顯微鏡觀察拍照記錄。 

實驗注意事項： 

交付標準： 

1、成功定向誘導分化的細胞。 

2、完整項目報告（材料、試劑、儀器、方法、數據分析、實驗結果）。 

客戶提供：細胞種類和誘導分化細胞類型、生長良好的細胞，也可交由星森林代購。

需確認的信息 

1. 細胞樣品是否需要進行處理以及樣品的分組情況？

2. 客戶是否需要我方提供免疫熒光抗體和生物學功能檢測試劑盒？

收費標準/服務周期/提供結果： 

歡迎咨詢詳談，我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

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